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RNA恒溫快速擴增試劑盒(基礎型)

貨號:WLRB8204KIT

品牌:安普未來

規格:48T

價格:2400

產品介紹

RNA恒溫快速擴增試劑盒(基礎型)使用說明書


原理概述:

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術:在恒溫條件下(42 °C),特殊修飾的反轉錄酶利用特異性引物DNA和模板RNA合成cDNA鏈,反應體系中的重組酶、單鏈DNA結合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA鏈為模板進行快速核酸擴增反應。適用于實驗室級別的RNA擴增以及其他檢測用途的RNA擴增使用。

產品特點:

本試劑盒具有靈敏度高、特異性強、反應時間短(僅需30 mins)等優點,反應組分為干粉狀態,操作簡便,易于保存。

本試劑對設備要求低,金屬浴、水浴鍋等即可進行反應操作,無需購買PCR擴增儀等價格高昂的專屬設備。

引物設計:

建議使用長度在 30-35 bp的引物,引物過短會影響擴增速度和檢測靈敏度;引物設計避免形成二級結構而影響擴增;擴增子長度建議在150-300 bp,通常不超過500 bp。

試劑盒組成:

組成

含量

A buffer

1.6 mL×1

B buffer

150 μL×1

試劑

48

使用說明書

1

試劑盒儲存:

運輸條件:低溫運輸;

儲存條件:儲存溫度 ≤ -20 oC,避光保存,避免重壓、反復凍融;

產品有效期:12個月。


操作步驟:提前30分鐘將試劑盒所需組分取出,室溫融化,震蕩混勻

1)    每個干粉反應管加入29.4 μL A buffer(注意:A buffer需完全融化混勻,否則會對實驗效果產生影響);

2)    每個反應管分別加入2 μL上游引物和2 μL下游引物(引物濃度10 μM,對于多個反應、步驟1和步驟2可以混合后再分裝至反應管中);

3)    向反應管中依次加入12.1 μL ddH2O和2 μL核酸模板(可根據核酸濃度調整加入的核酸模板體積,并相應調整加入的ddH2O體積,至模板與ddH2O總體積為14.1 μL);

4)    最后向反應管中加入2.5 μL B buffer并充分混合(對于多個反應,建議將B buffer加至反應管的蓋子內側,上下顛倒反應管8-10次混勻);

5)    混勻后,將反應液甩(或快速離心)至管子底部,然后立即將反應管放入恒溫設備中42 oC孵育30 mins;

6)    反應結束后,加入50 μL酚/氯仿,1:1抽提反應液,12000 rpm離心5 mins,取5 μL上清進行電泳檢測。(或者使用DNA產物純化試劑盒處理反應液后進行電泳檢測)

體系配制

組分

體積(μL

A buffer

29.4

上游引物(10 μM)

2

下游引物(10 μM)

2

ddH2ORNA模板

14.1

B buffer

2.5

總體積

50

注意事項:

1.  由于試劑盒靈敏度非常高,在進行反應時請注意避免微量核酸染,并盡量考慮設置空白對照以確認是否有核酸污染。

2.  試劑盒保質期12個月。每次使用時,請取出實驗所需的MIRA反應單元的數量,置于冰浴條件下并在8小時內使用;剩余部分,請置于存儲條件下。

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產品名稱

貨號

規格

目錄價格

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50/

1650

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